藥物血漿蛋白結(jié)合率(plasma protein binding, PPB)是藥物在動(dòng)物體內(nèi)重要的藥理學(xué)參數(shù)之一,影響著藥物體內(nèi)游離濃度進(jìn)而影響藥物的處置過(guò)程。藥物在進(jìn)入血液后與血漿蛋白會(huì)有不同程度結(jié)合,血液中游離藥物的比例會(huì)影響其在體內(nèi)吸收、分布、代謝和排泄的過(guò)程,與血漿蛋白結(jié)合的藥物可能會(huì)有更長(zhǎng)的半衰期和清除速率,因此測(cè)定血漿蛋白結(jié)合率對(duì)于理解化合物的活性以及組織分布有很重要的參考意義。
1 結(jié)合蛋白類(lèi)型
血漿蛋白主要作為載體負(fù)責(zé)各類(lèi)外源性和內(nèi)源性分子在循環(huán)系統(tǒng)內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)。其中參與小分子藥物結(jié)合的主要有白蛋白、α-1-酸性糖蛋白(AAG)、球蛋白和脂蛋白,主要以白蛋白和AAG為主。藥物與蛋白的結(jié)合強(qiáng)弱主要與藥物-蛋白親和力、蛋白豐度相關(guān)。
2 血漿蛋白結(jié)合率常用測(cè)定方法
目前常用于PPB測(cè)定的方法主要包括平衡透析法(equilibrium dialysis),超濾法(utrafiltration method),超速離心法(ultracentrifugation method),凝膠過(guò)濾法(gel filtration)等。 其中,平衡透析法是基于藥物結(jié)合的平衡原理來(lái)測(cè)定藥物游離濃度的方法,也是研究藥物血漿蛋白結(jié)合率的經(jīng)典方法。
平衡透析法
常用種屬:大鼠,小鼠,犬,猴,人
分析方法:LC-MS/MS
各種藥物以一定的比率與血漿蛋白結(jié)合之后,在血漿中會(huì)同時(shí)存在結(jié)合型與游離型兩種類(lèi)型,游離性藥物具有藥物活性。藥物與血漿蛋白結(jié)合會(huì)成為結(jié)合型藥物,暫時(shí)失去藥理活性,并且儲(chǔ)存于血液中,起到藥庫(kù)的作用,對(duì)于藥物作用及其維持時(shí)間長(zhǎng)短具有重要的意義。一般蛋白結(jié)合率高的藥物體內(nèi)消除慢,作用維持時(shí)間長(zhǎng),藥效平穩(wěn)。結(jié)合率低的藥物體內(nèi)消除快,同時(shí)作用時(shí)間短,藥效有很大的波動(dòng)。
平衡透析法測(cè)定血漿蛋白結(jié)合率是用透析膜將蛋白質(zhì)溶液與緩沖液分隔開(kāi),建立在兩者之間的一種平衡狀態(tài),只有分子量小的藥物小分子可以通過(guò)。透析的動(dòng)力是擴(kuò)散壓,擴(kuò)散壓是由橫跨膜兩邊的濃度梯度形成的。透析的速度與膜的厚度、透析的小分子溶質(zhì)在膜兩邊的濃度梯度及透析溫度等因素有關(guān)。平衡透析法能夠直接測(cè)出為與蛋白結(jié)合的藥物小分子的數(shù)量,這是分析蛋白與小分子物質(zhì)結(jié)合的關(guān)鍵,從而能夠求出結(jié)合位點(diǎn)數(shù)及結(jié)合常數(shù)。
如圖所示,利用半透膜將左右兩室進(jìn)行分隔,左側(cè)加入含藥的蛋白溶液,右側(cè)加入空白緩沖液,未被結(jié)合的游離藥物可以自由穿過(guò)半透膜,孵育一定時(shí)間后兩側(cè)達(dá)到平衡,游離藥物濃度相等,通過(guò)測(cè)定兩側(cè)藥物濃度即可計(jì)算得到血漿蛋白結(jié)合率。
平衡透析法在測(cè)定藥物血漿蛋白結(jié)合率具有操作簡(jiǎn)單、溫度易于控制、PH值可調(diào)、設(shè)備成本低廉等優(yōu)點(diǎn)。但是同時(shí)存在達(dá)成平衡時(shí)間較長(zhǎng)、溶液體積會(huì)變化,且透析時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能會(huì)造成由加熱或代謝引起的被測(cè)物質(zhì)的降解等缺點(diǎn)。因此在利用平衡透析法測(cè)定藥物血漿蛋白結(jié)合率,或者藥物與蛋白質(zhì)相互作用時(shí)需要與其他的一些方法聯(lián)用,才能獲得更準(zhǔn)確的作用信息。一般只有血漿蛋白結(jié)合率高,分布容積小,消除慢以及治療指數(shù)低的藥物在臨床上的這種相互作用才有意義。
3 血漿蛋白結(jié)合平衡透析裝置
匯智泰康針對(duì)血漿蛋白結(jié)合率測(cè)定試驗(yàn)研發(fā)針對(duì)性的平衡透析裝置,基于平衡透析法的原理而設(shè)計(jì)96孔平衡透析裝置,可用于血漿蛋白結(jié)合率的測(cè)定。該裝置能夠減少非特異性的透析設(shè)備表面的藥物吸附,縮短平衡時(shí)間,提高樣品分析的通量。透析膜(半透膜)選用高分子膜,孔徑可根據(jù)客戶(hù)需求定制。
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